干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關(guān),在菌體受熱時(shí),當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞內(nèi)含水量越大,則蛋白質(zhì)凝固就越快,反之含水量越小,凝固緩慢。因此,與濕熱滅菌相比,干熱滅菌所需溫度高(160~170℃),時(shí)間長(zhǎng) (1~2h)。但干熱滅菌溫度不能超過 180℃。否則,包器皿的紙或棉塞就會(huì)燒焦,甚至引起燃燒。
滅菌的原理就是使蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子發(fā)生變性,從而達(dá)到滅菌的作用,實(shí)驗(yàn)室中常用的就是干熱滅菌和濕熱滅菌。滅菌是指殺滅物體中所有微生物的繁殖體和芽孢的過程。消毒是指用物理、化學(xué)或生物的方法殺死病原微生物的過程。
消毒滅菌實(shí)驗(yàn)步驟
高壓蒸氣滅菌:首先將內(nèi)層鍋取出,再向外層鍋內(nèi)加入適量的水,使水面與三角擱架相平為宜。
放回內(nèi)層鍋,并裝入待滅菌物品 (培養(yǎng)基等)。注意不要裝得太擠,以免防礙蒸氣流通而影響滅菌效果,三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸,以免冷凝水淋濕包口的紙而透人棉塞。加蓋,并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺拴,使螺栓松緊一致,勿使漏氣。
用電護(hù)或煤氣加熱,并同時(shí)打開排氣閥,使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后,關(guān)上排氣閥,讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸氣壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所得壓力時(shí),控制熱源,維持壓力至所需時(shí)間。滅菌所需時(shí)間到后,切斷電源或關(guān)閉煤氣,讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降,當(dāng)壓力表的壓力降至“0”時(shí),打開排氣閥,旋松螺栓,打開蓋子,取出滅菌物品。
干熱滅菌: 裝入待滅菌物品;將包好的待滅菌物品(培養(yǎng)皿,試管,吸管等)放入電烘箱內(nèi),關(guān)好箱門。
升溫:接通電源,撥動(dòng)開關(guān),打開電烘箱排氣孔,旋動(dòng)恒溫調(diào)節(jié)器至綠燈亮,讓溫度逐漸上升。當(dāng)溫度升至 100℃時(shí),關(guān)閉排氣孔。在升溫過程中,如果紅燈熄滅,綠燈亮,表示箱內(nèi)停止加溫,此時(shí)如果還未達(dá)到所需的 160~170℃溫度,則需轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)器使紅燈再亮,如此反復(fù)調(diào)節(jié),直至達(dá)到所需溫度。
恒溫:當(dāng)溫度升到 160~170℃時(shí),借恒溫調(diào)節(jié)器的自動(dòng)控制,保持此溫度 2h。
降溫:切斷電源、自然降溫。
開箱取物:待電烘箱內(nèi)溫度降到 70℃以下后,打開箱門,取出滅菌物品。
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